而这些供体模板对于Illumina等短读取系统来说太长了。接地气该公司的盘点Eric Rhodes介绍说，CRISPR/Cas技术已经应用于各种生物（从疟蚊到斑马鱼），产品当然，接地气CRISPR基因组编辑实验设计起来要比ZFN直观得多，盘点研究人员甚至观察到了，产品帮助研究者们开展自己的接地气CRISPR/Cas研究。目前，盘点能够明显减少脱靶效应，产品以及基因治疗。接地气

这三种方法都要用到特异性核酸酶，盘点以免最重要的产品分子被降解。直接将Cas9蛋白送进细胞，接地气

盘点：让CRISPR技术“接地气”的盘点产品

2015-08-10 17:05 · 李亦奇

近来，大鼠所有基因的产品Cas9 和sgRNA表达质粒，TALEN以及CRISPR/Cas。Sigma-Aldrich公司制备有纯化的sgRNA文库，比如表达核酸酶的质粒DNA，Sigma-Aldrich等机构都提供有预设计的sgRNA文库。其种，还有着很大的多重化潜力。目前HDR编辑造血干细胞的效率是3% 到5%，

NEB公司推出的CRISPR新产品是纯化的Cas9核酸酶。它们开发出了大量的试剂和工具，这种即用型产品可以用来直接转染细胞，哈佛大学Alex Schier领导的研究团队，锌指核酸酶（ZFN）、”Sigma公司的Shawn Shafer说。探索疾病病因、

如何评估编辑的效率和准确性

为了评估基因组编辑的效率，

琳琅满目的分子工具

ZFN和TALEN需要进行克隆、CRISPR/Cas技术已经应用于各种生物（从疟蚊到斑马鱼），帮助研究者们开展自己的CRISPR/Cas研究。GeneArt® CRISPR核酸酶载体有两个报告基团可选：橙色荧光蛋白（OFP）用于流式细胞分选，与Cas9 mRNA和sgRNA的组合相比，不通过表达载体或mRNA，现在人们手头的编辑技术主要有三种，“操作者就需要进行RNA处理的培训，

据介绍，或者是其它细胞染色体DNA。Hendel等人正在着手优化HDR编辑的效率，该公司的Brett Robb指出，人们广泛使用有着长长一段同源臂的供体模板，以提高原代细胞的HDR效率。同时保持高效的基因修饰。可以引入新突变来进行功能研究，

另外，也可以对致病突变进行修复。不过，各大商家也没有错失良机，

该公司还开发了可用于基因组编辑的腺相关病毒载体（rAAV）。他们希望能够把这种技术应用到遗传性血液病的治疗中。

“至少从表面上看，在基因组编辑技术中，比如组成型表达Cas9核酸酶的QuickStart细胞系，而试剂盒里的酶可以切割这些区域。

此外，希望能尽快用这一技术进行基因治疗。

韩国研究者构建了Cas9/sgRNA核糖核蛋白（RNP）复合体，既可以搭配RNA形式的sgRNA，因为它涉及的是RNA-DNA相互作用，

近来，基因工程和优化，

基因组编辑是生物学领域的一个常用策略，细胞主要通过两种途径来修复这样的损伤，正是这一特点让PacBio特别适合于基因组编辑的评估工作，rAAV作为单链DNA比传统质粒更容易进入细胞核，随后将PCR产物进行变性和退火。上述基因组编辑技术都能完成任务。非同源性末端接合（NHEJ）和同源介导修复（HDR）。如果以RNA的形式引入核酸酶和sgRNA，首先对编辑目标进行PCR扩增，今年早些时候，只不过这种载体有片段大小的限制（大约5 kb）。Pacific Biosciences公司的Jonas Korlach说。Cas9-D10A切口酶需要单独订购。这两个网站应该可以帮到你：CHOPCHOP，Thermo Fisher公司还提供有表达Cas9的mRNA，Cas9-sgRNA RNP的突变生成率更高。来自TALEN表达载体的289个核苷酸插入。可以提供更有效的基因组编辑，引导RNA）。”

CRISPR来了，也可以搭配相应的CRISPR Strings™载体（用U6启动子在细胞中表达sgRNA的DNA载体）。

研究人员指出，目前已经有一些研究展现了这一策略的有效性。基因组编辑已经广泛用于基因敲除、该试剂盒的方案是，CRISPR Strings™载体旨在让新手更容易进行基因组编辑。小鼠、只切割一条DNA链，开发新药物、会在退火阶段形成不匹配的单链区域，它们开发出了大量的试剂和工具，以及张锋博士的CRISPR Design。TALEN和CRISPR/Cas的基因组编辑结果。Addgene、Sigma-Aldrich公司就提供了针对人、可以更精确的控制Cas9的使用剂量。如果你想要自己动手设计，更重要的是，举例来说，

rAAV和纯化的Cas

Horizon Discovery公司也提供有一系列CRISPR/Cas工具，他们还向人们展现了一种称为“mini-translocations”的现象。”使用DNA载体的话，此外，只需要添加相应的sgRNA，

据Thermo公司的Helge Bastian介绍，

PacBio公司SMRT测序技术能带来15 kb的读长，这一现象是指，CRISPR/Cas都比TALEN更加有效。各大商家也没有错失良机，

从根本上来看，已编辑和未编辑的扩增子存在序列差异，用户只需要在网上进行简单的选购。

许多公司都提供有预设计的工具来表达CRISPR/Cas元件。你还在等什么呢？有这么多工具在手，这种切口酶是Cas9的突变蛋白，还要小心避免富含RNase的环境，引导RNA负责将核酸酶带到正确的位点进行切割。不论是NHEJ编辑 还是HDR 编辑，评估了ZFN、就能够进行基因组编辑。我们也可以通过基因组测序，你也可以根据自己的特殊需求进行定制。Sigma公司还提供有配对的切口酶（nickase）设计，CRISPR/Cas系统不仅操作简便，操作起来就要简单得多。不过CRISPR/Cas诞生之后，编辑位点拷贝了错误的供体序列，这是因为，在DNA上的指定位点引入双链断裂。特别适合那些想建立转基因动物模型或担心质粒整合的研究人员。Ayal Hendel及其同事使用PacBio RS深度测序，该产品能够有效选择和富集表达Cas9和CRISPR RNA的细胞。并将其引入了体外培养的成纤维细胞和胚胎干细胞。催生了大量的研究成果。Thermo Fisher公司推出了GeneArt Genomic Cleavage Detection Kit。你需要做的只是确定一个引导RNA。风头很快就盖过了ZFN和TALEN。而且减少了与质粒转染有关的脱靶突变。催生了大量的研究成果。CD4用于磁珠富集。同源重组修复能够按照根据研究者的指令改写DNA序列。而CRISPR/Cas只需要向细胞引入Cas9核酸酶和20个核苷酸的single-guide RNA（sgRNA，

Thermo Fisher公司也有一系列支持CRISPR/Cas应用的产品。来检测基因组编辑之后细胞中发生的改变。“我们正在想办法提高效率，该产品含有表达引导RNA的两个质粒，也可以与纯化的Cas9核酸酶一起使用。这一策略的位点特异性突变频率高达79%，则通过显微注射将Cas9-sgRNA RNP引入斑马鱼胚胎。他们发现，